大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)需要注意哪些問(wèn)題

　　H9c2 (2-1)大鼠心肌細(xì)胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細(xì)胞株亞克隆得到的細(xì)胞株；H9c2(2-1)細(xì)胞表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)細(xì)胞中的成肌細(xì)胞能融合形成多核的肌管，并對(duì)乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細(xì)胞融合發(fā)生得很快。
 

　　培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：
 

　　1、鼠齡選擇：新生1～3d齡大鼠的心肌細(xì)胞在出生后3d內(nèi)具有部分的增殖能力，而成年大鼠的心肌細(xì)胞則為終末分化細(xì)胞，不再具有分裂增殖能力。因此，建議選擇1～3d齡的大鼠進(jìn)行原代培養(yǎng)以獲得更多活性心肌細(xì)胞。
 

　　2、細(xì)胞復(fù)蘇：溶解細(xì)胞過(guò)程要迅速，已溶解的凍存細(xì)胞不能在常溫下存放太久，需要盡快離心去除DMSO。
 

　　3、細(xì)胞凍存：推薦配比為55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO的凍存液。在凍存時(shí)，盡量吹散細(xì)胞并注意控制吹打力度。
 

　　4、細(xì)胞培養(yǎng)：培養(yǎng)條件為培養(yǎng)基：DMEM+10% FBS+1% P/S，推薦傳代比例為1:2～1:4，換液頻率為2～3次/周，培養(yǎng)箱溫度設(shè)定為37℃，5% CO2。傳代操作包括：去掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入PBS進(jìn)行沖洗，去上清后加入0.25%胰酶進(jìn)行潤(rùn)洗，去上清后放入CO2培養(yǎng)箱消化2～4min，加入培養(yǎng)基終止消化并吹打均勻。
 

　　5、注意保持細(xì)胞匯合度在30%～90%，避免細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)和分化。
 

　　6、每一步操作都要輕柔小心，以免對(duì)細(xì)胞造成損傷。
 

　　7、選用優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基，減少有害物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的刺激。